高温消泡剂与分离提纯之盐析法

微生物酶的提取方法，因酶的结合状态与稳定性的不同，应用部门对产品的纯度要求不同，而有一定的区别。如果提取到的酶是一种可溶于水的复杂混合物，则需要进一步加以纯化。适用于大生产的提纯方法是以降低成本、提高效能而同时又提高产品纯度和质量为前提，事先应当经小试验规模充分对比，从中加以挑选。理想的提纯方法应满足两个条件，即比活性的提高与总活性的回收高，但实际上往往难以兼得。 盐析剂中性盐的选择：MgSO4,(NH4)2SO4,Na2SO4，NaH2PO4是常用的盐析用中性盐。其盐析蛋白质的能力随蛋白质的种类而不同，但一般说来这种能力按上述顺序依次增大。一般可以说含有多价阴离子的中性盐与高温消泡剂其盐析效果好。但实际上(NH4)2SO4是最多用的盐析剂，这是因为它的溶解度在较低温度下也是相当高的。有的酶只有在低温下稳定，而低温下Na2SO4，NaH2PO4的溶解度很低，常常不能达到使这种酶盐析的浓度。 盐析剂用量的决定：不同的酶使之盐析沉淀的盐析剂与高温消泡剂用量是不同的，随共存的杂质的种类和数量而有所差异。因此，适当的使用量只能根据实验决定，并根据数据可以绘制出盐析曲线。 pH和温度的影响：蛋白质的溶解度在无盐存在下，以在等电点时为最小，在稀盐状态时大致也是这样。但在高浓度的中性盐溶液与高温消泡剂中，原有蛋白质溶液pH的影响不大，实际上溶液最终的pH为盐析剂与高温消泡剂所决定。在无盐或稀盐溶液中，温度低、蛋白质的溶解度也低，但在高温消泡剂与高浓度盐溶液中，温度高则蛋白质的溶解度反而低。因此，一般说来盐析时不要降低温度，除非这种酶不耐热。 分部盐析法：不同的酶或其它蛋白质在同一中性盐溶液中溶解度是不同的。剂用这一特性，先后添加不同浓度的中性盐，就可能把其中的不同酶或杂质蛋白分别盐析出来。为了保证这种可能性，需要做出目的酶的盐析曲线，先以低的中性盐浓度除去大部分的杂蛋白质，此时目的酶则很少沉淀下来。在分离沉淀物之后，在滤液中再补加一定量的同一中性盐与高温消泡剂，使达到沉淀目的酶所需盐析剂与高温消泡剂的浓度，此时目的酶基本上全部析出。 盐析法的优点是在常温沉淀过程中不会造成酶的失活，沉淀物在室温下长时间放置也不会失活，在沉淀酶的同时夹带沉淀的非蛋白质杂质少，而且适用于任何酶的沉淀。 它的缺点是沉淀物中含有大量的盐析剂和高温消泡剂。盐析沉淀物的收集一般不常用离心分离法，而用倾出法。 本文参考《发酵工程原理与技术》一书。 相关链接 2023年安徽黄山团建圆满结束

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