高温消泡剂与分离提纯之盐析法

发布时间:2012-12-11 14:42
微生物酶的提取方法,因酶的结合状态与稳定性的不同,应用部门对产品的纯度要求不同,而有一定的区别。如果提取到的酶是一种可溶于水的复杂混合物,则需要进一步加以纯化。适用于大生产的提纯方法是以降低成本、提高效能而同时又提高产品纯度和质量为前提,事先应当经小试验规模充分对比,从中加以挑选。理想的提纯方法应满足两个条件,即比活性的提高与总活性的回收高,但实际上往往难以兼得。 盐析剂中性盐的选择:MgSO4,(NH4)2SO4,Na2SO4,NaH2PO4是常用的盐析用中性盐。其盐析蛋白质的能力随蛋白质的种类而不同,但一般说来这种能力按上述顺序依次增大。一般可以说含有多价阴离子的中性盐与高温消泡剂其盐析效果好。但实际上(NH4)2SO4是最多用的盐析剂,这是因为它的溶解度在较低温度下也是相当高的。有的酶只有在低温下稳定,而低温下Na2SO4,NaH2PO4的溶解度很低,常常不能达到使这种酶盐析的浓度。 盐析剂用量的决定:不同的酶使之盐析沉淀的盐析剂与高温消泡剂用量是不同的,随共存的杂质的种类和数量而有所差异。因此,适当的使用量只能根据实验决定,并根据数据可以绘制出盐析曲线。 pH和温度的影响:蛋白质的溶解度在无盐存在下,以在等电点时为最小,在稀盐状态时大致也是这样。但在高浓度的中性盐溶液与高温消泡剂中,原有蛋白质溶液pH的影响不大,实际上溶液最终的pH为盐析剂与高温消泡剂所决定。在无盐或稀盐溶液中,温度低、蛋白质的溶解度也低,但在高温消泡剂与高浓度盐溶液中,温度高则蛋白质的溶解度反而低。因此,一般说来盐析时不要降低温度,除非这种酶不耐热。 分部盐析法:不同的酶或其它蛋白质在同一中性盐溶液中溶解度是不同的。剂用这一特性,先后添加不同浓度的中性盐,就可能把其中的不同酶或杂质蛋白分别盐析出来。为了保证这种可能性,需要做出目的酶的盐析曲线,先以低的中性盐浓度除去大部分的杂蛋白质,此时目的酶则很少沉淀下来。在分离沉淀物之后,在滤液中再补加一定量的同一中性盐与高温消泡剂,使达到沉淀目的酶所需盐析剂与高温消泡剂的浓度,此时目的酶基本上全部析出。 盐析法的优点是在常温沉淀过程中不会造成酶的失活,沉淀物在室温下长时间放置也不会失活,在沉淀酶的同时夹带沉淀的非蛋白质杂质少,而且适用于任何酶的沉淀。 它的缺点是沉淀物中含有大量的盐析剂和高温消泡剂。盐析沉淀物的收集一般不常用离心分离法,而用倾出法。 本文参考《发酵工程原理与技术》一书。
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