发酵罐菌种实验室种子制备

发布时间:2013-11-13 8:32
实验室种子制备包括琼脂斜面培养、固体培养基扩大培养和摇瓶液体培养等,目的是为种子罐提供种子。 保藏在砂土管或冷冻干燥管中的菌体在无菌条件下接入适合于孢子萌发或菌丝生长的斜面培养基中培养,成熟后可挑选正常的孢子再一次接入试管斜面。根据菌种的生理生长特性不同,提供给种子罐的菌种状态也不同,分为: ①对于产孢子能力强或孢子发芽、生长繁殖快的菌种,可采用固体培养基培养孢子,孢子可直接作为种子罐的种子。如青霉素产生菌产黄青霉菌。
  ②对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种,可以用摇瓶液体培养法。将袍子接入液体培养基的摇瓶中,振荡培养,获得菌丝体作为种子。如产链霉素的灰色链霉菌。
  ③对于不产孢子的细菌,如生产谷氪酸的产生菌,谷氨酸棒杆菌一般采用斜面营养细胞保藏法,4 ℃冰箱保藏的斜面菌种用固体斜面活化培养后,即呵接入茄子瓶斜面或三角瓶液体培养,此培养物即可作为种子罐的种子。
  ④酵母菌一般保藏在麦芽汁琼脂斜面培养基上,于4℃冰箱保藏,扩大培养可逐级扩大到10 ml液体试管、250 ml 三角瓶、1000 ml 三角瓶,即可作为100 L麦芽汁种子罐的种子。
固体斜面菌种培养 固体斜面试管培养在无菌室内进行,菌种室需经常清扫和消毒灭菌,以防止杂菌和噬菌体的污染。生产上使用的斜面菌种一般只移接三次,每次可移接数支,分别扩大培养后使用,不宜多次移种,避免菌种的自然变异引起的菌种不纯。因此,菌种的分离纯化工作是企业经常性的工作。斜面培养的培养基和培养条件根据所用生产菌种的不同而异。 固体培养基扩大培养 固体培养基扩大培养包括茄子瓶、克氏瓶、培养皿、蘑菇瓶、一三角瓶、瓷盘等培养方式。可以进行摇瓶培养或静置培养。 摇瓶液体培养 三角瓶放到摇瓶机或摇床上,振荡或回旋培养,摇瓶通气最的大小取决于摇瓶机型式,转数、振程(或偏心距)、三角瓶容量、装料量。摇瓶培养是为了在振荡过程中溶入较多的氧,以供微生物在生长繁殖过程中氧的消耗。实验室阶段的培养过程中,因为菌种和培养物的量较少,可以在无菌状态下直接接入。 本文参考《发酵工程原理及技术》一书。
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